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家蚕去乙酰化酶BmSIRT6的基因克隆、表达及其功能的初步探究
摘要 Sirtuin 6(去乙酰化酶6,SIRT6)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖酶,是一种去乙酰化酶。SIRT6与DNA修复、葡萄糖和脂质代谢以及线粒体有关,SIRT6的缺乏会导致线粒体某些基因的表达降低,参与机体的能量代谢调控。对家蚕SIRT6同源蛋白BmSIRT6进行编码基因克隆、表达、抗体制备并进行功能的初步探究。用制备的BmSIRT6兔多抗进行免疫荧光染色,发现BmSIRT6蛋白在BmN细胞的细胞核和细胞质中都存在,暗示该蛋白在整个细胞都发挥作用。在BmN细胞中过表达BmSIRT6蛋白,转录组测序发现273个差异表达基因,其中141个基因上调表达,132个基因下调表达;转录组数据结合qRT-PCR验证发现,核糖体(ribosome)途径和氧化磷酸化(oxidative phosphorylation)途径相关的基因显著差异富集。基于此,进行了BmN细胞的ATP含量和细胞活力检测,结果显示,BmSIRT6的过表达可显著增加BmN细胞中的ATP含量和细胞活力,表明BmSIRT6对细胞能量代谢具有调控作用。上述结果为深入研究BmSIRT6对家蚕的机体能量代谢调控及其可能的分子机制奠定基础。
关键词 家蚕; BmSIRT6; 多克隆抗体; 转录组测序; 能量代谢调控